實驗試劑

牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等

實驗設備

試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒天平、牛角匙、高壓蒸汽**鍋等

實驗步驟

1. 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備

   1) 計算  根據(jù)配方計算出實驗中各種藥品所需要的量，然后再分別稱量。

   2) 稱量  準確稱取各種成分。一些不易稱量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸紙上稱量，然后連同硫酸紙一起放入燒杯中。

   3) 溶解  向燒杯內加入所需的水量，將牛肉膏用水洗下后，取出硫酸紙棄去。加熱攪拌全溶后稍放冷。

   4) 調pH值  用酸度計或精密pH試紙測定其pH值，并用10％NaOH調至所需pH值，必要時用濾紙或脫脂棉過濾。一般比要求的pH高出0.2，因為高壓蒸汽**后，pH常降低。

   5) 分裝  根據(jù)不同需要，可將配好的培養(yǎng)基分裝入配有棉塞的試管或三角瓶內（附圖1-1）。注意分裝時避免培養(yǎng)基掛在瓶口或管口上引起雜菌污染。如液體培養(yǎng)基，應裝試管高度的1/4左右；固體培養(yǎng)基裝試管高度的1/5左右；裝入三角瓶的量以三角瓶容量的一半為限。

   6) 包扎  試管扎成捆。試管和三角瓶的棉塞外用硫酸紙和牛皮紙包扎，紙上表明培養(yǎng)基的名稱、配制日期等。

   7) **  培養(yǎng)基用0.1Mpa（15lb/in2）高壓蒸汽**15~20min，

2. 培養(yǎng)基的高壓蒸汽**

**原理：水的沸點可隨壓力的增加而提高，當高壓蒸汽**鍋中水煮沸時，因鍋是密閉的，蒸汽不能溢出，而使壓力增加，水的沸點和溫度也隨之增加。因此，高壓蒸汽**是利用高壓蒸汽產生的高溫，以及熱蒸汽的穿透能力來達到**的目的。一般在0.1Mpa（15lb/in2）的壓力時，溫度可達121℃只要維持15~20min，就可殺死一切微生物的營養(yǎng)體和它們的各種孢子。

**方法：

   1) 加水于**器內到規(guī)定的水平面。

   2) 需**的物品（分裝在試管、三角燒瓶中的固、液體培養(yǎng)基），棉塞、硅膠泡沫塞等用防潮紙包好（防止鍋內水汽把棉塞淋濕），放入**鍋內的套筒中。擺放要疏松，不可太擠，否則阻礙蒸汽流通，影響**效果。

   3) 將**鍋蓋的排氣管插人套筒側壁的凹槽內，關閉**鍋蓋旋緊螺栓，切勿漏氣。

   4) 打開放氣閥，加熱，熱蒸汽上升，以排除鍋內冷空氣，排氣約5~ l0min，關閉放氣閥。

   5) 關閉放氣閥后，整個**鍋成為密閉狀態(tài)，而蒸汽又不斷增多，這時壓力和溫度都上升，直至壓力表指針達到所需壓力時，開始計時，通過調節(jié)熱源，維持此壓力到所需時間。

   6) **完畢，待壓力自然降至0時，打開放氣閥，注意不能打開過早，否則突然降壓致使培養(yǎng)基沖騰，使棉塞、硅膠泡沫塞沾污，甚至沖出容器以外。

   7) 打開**鍋蓋，取出已**的器皿及培養(yǎng)基。

   8) **鍋用完后，將鍋內剩余的水倒掉，以免日久腐蝕。

3. 微生物的分離與純化

借助于劃線將混雜的細菌材料逐步稀釋，*后在瓊脂平板上分散開來，使之出現(xiàn)單一菌落而達到分離純化的目的。

注意事項(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制備、微生物的分離與純化)

1. 要嚴格按配方配制。

2. 調pH不要過頭。

3. 高壓**要注意物品不要過多，加熱后排除冷空氣，到時降壓回零取物。

4. 劃線法分離純化微生物注意各區(qū)勿相互交叉。